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直接免疫荧光法

添加时间:2022-10-11

原理:SmIg 是B 细胞的抗原识别受体,也是B 细胞特异的表面标志,用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig 抗体,在一定条件下与淋巴细胞混合,荧光素标记的抗Ig 抗体可以与B 细胞表面的Ig 结合,在荧光显微镜下观察可见B 细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B 淋巴细胞。



材料与仪器

ICR 小鼠

异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗小鼠Ig 抗体 Hank's液

台式离心机 离心管 吸管 移液管

1.  采用颈椎脱臼法处死小鼠,解剖取出脾脏放入盛有6 ml Hank's液的平皿中,用100 目钢网研磨,混匀。从中吸取1 ml细胞悬液放入一试管中,加满Hank's液,离心1000 rpm,10 分钟,洗涤细胞一遍。倾去上清,沉积的细胞恢复1 ml容积,即为约1x107/ml的细胞悬液。另取一支试管,吸取1x107/ml的细胞悬液0.4 ml加Hank's液3.6 ml,即为1x106/ml的细胞悬液。
 2.  取2 ml离心管两只,各加入1x106 /ml的细胞悬液1 ml,用台式离心机离心2000 rpm,3 分钟,弃去上清液。一支加入荧光素标记的兔抗鼠Ig抗体100 ul,另一支不加抗体作对照,置4 ℃冰箱30 分钟。

 3.  取出离心管,用Hank's 液洗涤细胞两次,以去除游离的抗体,最后一次离心后弃去上清液,留少许回流液,混匀,滴片,用荧光显微镜观察。

实验结果

 荧光显微镜观察,落射激发光下SmIg 阳性细胞可见环状或斑点状荧光。用钨丝灯光源透射光照明计数同一视野内淋巴细胞总数,共计数200~300 个淋巴细胞,算出其中SmIg 阳性细胞的百分数。




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