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HE 染色法全名苏木精-伊红染色法,是石蜡切片里最常用的染色法之一,适用于任何动物组织均可染色,可以看基本形态、病理病变情况,也是病理学、组织学、胚胎学等科研与教学中最基本、最通用的技术方法之一。
当我们在显微镜下观察组织和细胞时,一般是先把组织何细胞做成切片或者是涂片,组织和细胞的厚度一般在1~10μm,这个厚度的情况下,组织和细胞的透光性是最好的,基本上就没有颜色,在临床上,一张好的HE切片是病理科医生做出正确诊断关键步骤。
下面我们具体的来分享下方法:
实验材料
固定液:冰丙酮、常用95%乙醇
苏木精染液:称取苏木精粉0.5g,铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中,再取NaIO 31g,水5ml,然后加入甘油30ml和冰醋酸2ml,混合均匀,滤纸过滤,备用;
伊红染液:称取0.5g水溶性伊红染液,溶于100ml蒸馏水中;
稀盐酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%盐酸;
系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶;
培养皿、培养瓶、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。
实验步骤
1)石蜡切片脱蜡至水
依次将切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。
2)苏木素染细胞核
切片入Harris苏木素染3-8min,自来水洗,1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗,0.6%氨水返蓝,流水冲洗。
3)伊红染细胞质
切片入伊红染液中染色1-3min。
4)脱水封片
将切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。
5显微镜镜检,图像采集分析
若细胞用4%多聚甲醛固定,则染色时间相应延长,苏木素染色12-15min,伊红5min即可。
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