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蛋白质一级结构是组成蛋白质多肽链的线性氨基酸序列。蛋白测序,蛋白序列分析,蛋白一级结构分析,蛋白氨基酸序列分析是确定蛋白质全部氨基酸序列的过程。通过蛋白质测序获得的信息,有非常多有价值的用途,包括:1,用于蛋白质的鉴定 2,设计分子克隆的探针 3,合成可用作免疫原的肽段等。
蛋白测序服务常见有两种主要的方法:Edman降解(Harvey和Ferrier,2011; Bauer等,1997)和质谱分析(MS)(Sahukar等,2016)。目前使用最广的蛋白质测序和鉴定方法是质谱法,而Edman降解则是表征蛋白质N端最重要的方法之一。质谱法用于蛋白质序列分析,较Edman降解法而言,其优点在于,质谱法更敏感,可以更快地裂解肽,可以识别末端封闭或修饰的蛋白质。Edman降解测序法是能够获得蛋白质N端氨基酸序列信息的化学方法,由Pehr Edman在1950年代初期开发的。该方法可在不干扰肽键的情况下标记并对N末端的氨基酸序列进行分析(Hunkapiller,1988; Liu等人,2016)。Edman降解法在蛋白质样品N端序列分析中得到了广泛应用。但是在实际应用中,Edman降解法也有一定的局限。例如N末端封闭或有化学修饰的情况下将不能使用Edman降解法对蛋白质序列进行分析。这时就可以借助先进的nano LC-MS/MS纳升色谱结合串联质谱平台对N端序列进行质谱测序,质谱平台可以实现末端封闭和修饰的蛋白质的序列分析,与Edman降解法形成互补,保证N端测序服务的顺利进行
有许多可以进行样品制备的方法,没有特定的方法是效果最好的样品制备方式。每个样品方式都有各自的优点和缺点。制备特定样品的最佳方法可结合实验室的经验及常用方法,并参考您自己关于产率、纯度、成本和速度的要求。最常用于制备蛋白质测序样品的方法包括:
1. 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
2. 高效液相色谱(HPLC)
3. 毛细管电泳(CE)
选择样品制备方法时需要考虑的因素包括:1)实验周期要求;2)样品的纯度要求;3)所需蛋白的质量。
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