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SNP基因分型技术原理
首先通过PCR扩增含有SNP的基因组片段,然后通过序列特异性引物实现单碱基延伸,随后样品分析物与芯片基质共结晶后在真空管中受瞬时纳秒 (10-9s) 强激光激发;
核酸分子因此解吸附成为单电荷离子,由于电场中离子飞行时间与离子质量成反比,通过检测核酸分子在真空管中的飞行时间而获得样品分析物的精确分子量,从而检测出SNP位点信息。
SNP的常用检测方法:
1.直接测序法进行SNP分析
在所有SNP的检测方法中,检测片段进行直接扩增、测序是最为准确的方法。通常情况下,纯合型SNP位点的测序峰为单一峰型,而杂合型SNP位点的测序峰为套峰,很容易将其区分开来。通过直接测序方法进行SNP检测的检出率接近100%
2. SSCP方法:
单链构象多态性分析(single-strand conformation polymorphism,SSCP)是一种简单、高效地检测DNA或RNA序列中点突变的技术,由于实验成本较低,也是一种目前较为常用的方法
3.DNA芯片法:
DNA芯片技术是近年来新开发的一种DNA序列变异检测工具。DNA芯片(DNA chip),也称生物芯片(biochip),其大小与计算机上的CPU芯片相似,以玻璃、硅、聚丙烯等作 为载体基片,芯片上铺了一层肉眼看不见的DNA纤维“地毯”,即具有特定碱基序列的探针。待测基因经提取后,被切成长短不一的片段,经荧光化学物质标记 后,注射到嵌有芯片的载片上
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