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HE染色原理
HE 染色法为苏木精-伊红染色法,是石蜡切片技术里常用的染色法之一,也是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基础、最广泛的技术方法。
属性为碱性的苏木素染色液可以使细胞着蓝色,为酸性的伊红使细胞着红色,其结果胞核呈蓝色,胞浆呈红色。两种不同的染色液使细胞通过颜色来改变折光率,在光镜下呈现出细胞图像。
HE染色法之所以成为细胞染色最常用的方法是因为HE染色法过程中除化学反应外,还有物理作用中吸附、吸收效果,使HE染色提供良好的核浆对比染色效果。
实验步骤
1、样品制备:对于贴壁生长细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约1×105/ml,滴加于盖玻片上(置于6孔板中),培养相应时间后,取出细胞爬片,用PBS洗涤3次。
2、样品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗涤2次,每次1min。
3、染核:苏木素染液染色2-3min,自来水洗涤。
4、分色:镜下观察,若细胞核染色过深,用1%盐酸酒精溶液分色数秒,自来水洗涤。
5、染胞质:浸入伊红染液染色1min,自来水洗涤。
6、吹干或自然晾干细胞爬片后,中性树胶封片。
若细胞用4%多聚甲醛固定,则染色时间相应延长,苏木素染色12-15min,伊红5min即可。
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